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化橘红提取物中总黄酮测定方法比较研究.doc

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橘红 提取物 黄酮 测定 方法 比较 研究
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本 科 毕 业 论 文化橘红提取物中总黄酮测定方法比较研究二级学院 中药学院专 业中药学(中药分析鉴定方向)班 级 2011级(3)班学生姓名 邝展华学 号 1106503315指导教师 郑青霞2015年 4 月诚 信 声 明我声明,所呈交的毕业论文(设计)是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文(设计)中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺,论文(设计)中的所有内容均真实、可信。毕业论文(设计)作者(签名): 年 月 日目 录摘要 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙I~II1 前言 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙32 材料与仪器 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙52.1 材料 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙52.2 仪器 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙53 方法与结果 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙53.1 紫外分光光度法 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙53.2 铝盐络合法 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙73.3 SBC 法 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙93.4 总黄酮含量测定 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙114 讨论 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙124.1 紫外分光光度法机理 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙124.2 铝盐络合法机理 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙124.3 SBC 法反应机理 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙124.4 测定方法的比较 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙12参考文献 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙14综述 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙15致谢 ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙22I化橘红提取物中总黄酮测定方法比较研究摘要:目的 对比 3 种常见总黄酮测定方法(国家食品药品监督管理局颁布的《保健食品检验与评价技术规范实施手册》收载的保健食品总黄酮测定方法(直接紫外分光光度法测定);2010 版《中国药典》收录的铝盐络合法;国际公认的较为科学合理的是美国康奈尔大学刘瑞海教授的 Sodium Borohydride/Chloranil-Based Assay (简称 SBC 法 )。方法 以化橘红中总黄酮的含量为指标,从精密度、回收率、重复性、稳定性方面选取最优测定方案。结果 测定结果显示铝盐络合法测得值显著大于保健食品法和 SBC 法测得值。结论 化橘红黄酮类成分主要为二氢黄酮成分,在碱性条件下不稳定,因此不宜应用在碱性条件下操作的芦丁比色法,应用铝盐直接与黄酮类成分显色的原理,采用柚皮苷+铝盐的方法进行总黄酮测定。测定结果显示铝盐络合法测得值显著大于紫外分光光度法和 SBC 法测得值。关键词:化橘红;黄酮;测定方法IIStudy on Total flavonoids in Exocarpium citri Grandis extract comparative methodAbstract:Objective Comparison of 3 methods for the determination of total flavonoids (common method usedmanual “health food of total flavonoids of implementing technical standards for testing and assessment of health food was promugated by the State Food and Drug Administration ( bydirect ultraviolet spectrophotometry); 2010 Edition Pharmacopoeia “included“ Chinesealuminum salt complexing; internationally recognized more scientific and reasonable is a professor at the Cornell University Liu Ruihai Sodium Borohydrid/Chloranil-Based Assay America (SBC)). Select the best from the precision, recovery rate, stability and other aspects of measurement. Methods The content of total flavonoids in orange as the indicator, the precision, recovery, repeatability, stability determination of optimal selection of schemes.Results The results showed the aluminum salt complexing measured value was significantly higher than that of health food and SBC measured value.Conclusion Flavonois with polyamide column chromatography are selectively enriched containing phenolic hydroxyl radicals by UV spectrophotometry, without color determination, the result is accurate and simple, reasonable determination method.Keywords:Exocarpium citri Grand is,Flavone,assay method 31 前言目前,国际上对中药的利用和研究产生了浓厚的兴趣,传统中药越来越受到人们的青睐,具有很高的利用价值和潜在的市场前景。化橘红是我国特有的传统中药材,古代记载和现代研究表明化橘红内含多种活性成分,具有化痰、理气、健脾、消食、散寒等作用,始于胸中痰滞,风寒咳嗽,喉痒气喘,饮食积滞,呕吐痞闷等症。化橘红黄酮类化合物是目前研究的热点之一。中药化橘红( Exocarpium citri Grandis) 又名“化州橘红 ”、 “化州陈皮” 、 “柚皮橘红”等,是由芸香科(Rutaceae)植物化州柚(Citrus grandis(L.)Osbeck var.tomentosa Hort.)或柚(Citrus grandis(L)Osbeck) 未成熟或近成熟的果实外果皮干燥而成。化州柚原产于广东省化州市,果实比较小,果瓤酸苦。人们将未成熟果皮制得的化橘红称为“毛橘红” ,近成熟的称为“光橘红” ,两者均有助于消食、利气、散寒、化疲,主治风寒咳嗽、痰多气逆、食积暖气和呕恶痞闷等证 [1]。为了探究化橘红的功能性质,对其化学成分进行研究发现:化橘红主要有效成分有黄酮类化合物、挥发油、香豆素类化合物、多糖等 [2]。近年来,国际上掀起了新一轮的中医药热。自古以来,中药一直在中华民族的防病治病方面具有举足轻重的作用,即便是在今天,医学技术飞速发展,中药在人们的日常防治疾病中仍然扮演着重要角色。传统中医药被誉为“天然药物” 、 “绿色药物”等,逐渐成为世人青睐的对象。我国地大物博,中药材资源非常丰富,主要来源于自然界,分布广泛,品种繁多。当品种、产地、采集时间、加工方法等因素中的一项或几项不同时,中药材的质量也各不相同,而临床疗效与中药材质量密不可分。同时,中医药发展的国际环境也发生了深刻的变化。自古以来,化橘红就有着“南方人参” 、 “一片值一金”之称,被誉为“中华一宝” 。它曾获得世界华人协会推荐产品、21世纪国际健康绿色环保产品“金象金奖” 、2001年度国际农业博览会推荐名优产品等荣誉。本文主要针对化橘红黄酮类化合物的测定方法进行深入研究。黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物,是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物 [3]。它广泛存在于高等植物及羊齿植物的根、茎、叶、花、果实等中 [4],不仅数量种类繁多,而且结构类型复杂多样。黄酮类化4合物因其独特的化学结构而对哺乳动物和其它类型的细胞具有许多重要的生理、生化作用。一方面,黄酮类化合物具有高度的化学反应性,例如,它能清除生物体内的自由基,具有抗氧化作用 [5][6];另一方面,黄酮类化合物又具有很多重要的药理作用,对许多人类疾病具有治疗价值。它们拥有抑制酶的活性、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗糖尿病并发症等功能,且无毒无害,对人类的肿瘤、衰老、心血管病等退变性疾病的治疗和预防有重要意义,它作为弱雌激素,在治疗妇女更年期综合症方面有很好的应用前景。此外,黄酮类化合物还是茶及众多中草药如黄芩、银杏、沙棘等的活性成分。因此,引起了国内外化学家、药物学家的广泛重视,研究进展很快。黄酮类化合物是广泛存在于自然界的、泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结而成的一系列化合物,包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查尔酮、异黄酮类等化合物。很多黄酮类化合物具有生理活性,例如芦丁、槲皮素等能够增强心脏收缩, 减少心脏搏动数;杜鹃素具有止咳祛痰作用;黄芩苷具有抗菌消炎作用;汉黄芩素具有抑制肿瘤细胞作用;水飞蓟素具有保肝作用等 [7]。黄酮类化合物具有C6-C3-C6基本骨架,并且大都呈黄色,其生色团的基本结构是吡酮环和羰基,黄酮物质的呈色是由羟基的数目,结合的位置与交叉共扼体系共同决定的。黄酮、黄酮醇多呈灰黄到黄色;查耳酮为黄至橙黄色,二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类,不呈黄色,几乎为无色;花色素所显的颜色,随pH不同而改变。黄酮类化合物因大部分含有酚羟基,显酸性,易溶于碱性溶液;其分子中γ- 吡喃酮环上的1-氧原子,因有未共用电子对,故表现出微弱的碱性,可与强酸溶液反应。目前关于总黄酮的测定方法报导较多,收载入相关国家标准的有2种方法,国家食品药品监督管理局颁布的《保健食品检验与评价技术规范实施手册》收载的保健食品总黄酮测定方法(采用的是直接紫外测定法);2010版《中国药典》收录的“铝盐络合法” [8]。另外,国际公认的较为科学合理的是美国康奈尔大学刘瑞海教授的Sodium Borohydride/Chloranil-Based Assay(简称SBC法) [9]。此三法的准确性、合理性比较研究尚未见报道。本试验以化橘红提取物为研究对象,以其总黄酮含量为评价指标,比较了上述3种方法对其含量测定的影响,
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