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肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的药效及机理研究.doc

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肤悦康熏洗液 变应性 接触性皮炎 药效 机理 研究
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本科毕业论文肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的药效及机理研究二级学院 中药学院专 业中药学(中药分析鉴定方向)班 级 2011 级(3)班学生姓名 温暖学 号 1106503352指导教师 高玉桥2015 年 4 月诚 信 声 明我声明,所呈交的毕业论文(设计)是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文(设计)中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺,论文(设计)中的所有内容均真实、可信。毕业论文(设计)作者(签名): 年 月 日 目 录摘要 .............................................................I-II1 前言 ..............................................................12 实验材料 ..........................................................12.1 试剂 ............................................................12.2 仪器 ............................................................12.3 动物 ............................................................23 实验方法 ..........................................................23.1 豚鼠变应性接触性皮炎模型的建立 ..................................23.2 实验分组及给药 ..................................................23.3 观察及检测指标 ..................................................33.4 统计方法 ........................................................34 结果 ..............................................................44.1 豚鼠皮肤变化 ....................................................44.2 生化指标 ........................................................54.3 组织病理学观察 ..................................................55 结论 ..............................................................66 讨论 ..............................................................77 参考文献 ..........................................................9综述 ..............................................................10致谢 ...............................................................19肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的药效及机理研究摘要:目的 本实验通过建立豚鼠变应性接触性皮炎模型,观察肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的治疗作用及探讨其作用机制。方法 本实验以 2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱发建立豚鼠变应性接触性皮炎(ACD)模型,外用肤悦康熏洗液及外用泼尼松作对照,观察分组给药后豚鼠背部皮肤红肿程度及组织病理变化,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA 法)检测各组豚鼠血清中白介素-2(IL-2 )、白介素-6( IL-6)及白介素-10(IL-10)表达水平。结果 ACD模型的豚鼠不同程度地出现皮肤红肿结痂,血清中 IL-2 及 IL-10 浓度下降,而IL-6 则上升,镜下观察未见正常对照组豚鼠皮肤有炎症细胞,DNCB 激发后豚鼠皮肤则见不同程度的表皮细胞变性,说明实验造模成功。给药治疗后,与模型对照组比较,各浓度的肤悦康熏洗液对豚鼠变应性接触性皮炎治疗效果有显著性的的差异,主要表现在豚鼠皮肤的红肿程度减弱,不同程度地改善了表皮细胞炎性,上调了模型动物血清中 IL-2 及 IL-10 水平,而抑制了 上升的 IL-6 水平。结论 肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎有治疗作用,其作用机制可能与抑制 IL-6 及促进 IL-2、IL-10 等细胞因子的释放有关。关键词:肤悦康熏洗液;变应性接触性皮炎;药效研究;作用机理注:本论文题目来源于教师的中山市卫生局医学科研立项项目,项目编号为:2013J103Effects and mechanisms of Fuyuekang lotionOn guinea-pig allergic contact dermatitisAbstract: Objective To observe the Fuyuekang lotion effects and the mechanism of it on guinea-pig allergic contact dermatitis by establishing allergic contact dematits model. Methods The guinea-pig model of ACD induced by 2,4-dinithochor-benzere (DNCB) was established. Guinea-pig were randomly divided into 5 groups-blank group, DNCB model group, low-level and high doses of Fuyuekang lotion and prednisone group. Guinea-pig skin swelling and histopathologies were observed. The serum level of interleakin-2,interleakin-6,interleakin-10 and expression of IL-2, IL-6, IL-10 were detected by the method of ELISA. Results The ACD guinea-pigs had swelling symptoms in varying degrees. The levels of IL-2 and IL-6 were declined, but the level of IL-10 was rose. Inflammatory cells were not visibled under a microscope in the normal control group. The ACD guinea-pigs showed epidermal cell degeneration in different degrees. The results showed the guinea-pig model of ACD were succeed. After drug administration, there was difference of the effcets between DNCB model group, low-level and high doses of Fuyuekang lotion and prednisone group. Fuyuekang lotion reduced the swelling degree、 improved the inflammatory cells and declined the level of IL-6 in the serum of the ACD guinea-pig, but rose the levels of IL-2 and IL-10. Conclusion Fuyuekang lotion could relieve the inflammation of ACD. The mechanism of its action may be related with inhibiting the release of IL-2, IL-6 and IL-10.Keywords: Fuyuekang lotion, allergic contact dermatitis, pharmacodynamics, mechanism01 前言变应性接触性皮炎(ACD)是迟发型变态反应引起的炎症皮肤病,是 T 细胞介导的针对皮肤接触致敏原的免疫反应,属于 IV 型超敏反应。目前用于控制急性变应性接触性皮炎炎症的药物主要使用抗组胺药物、糖皮质激素、保湿剂外用以及控制反复感染等为主,以达到镇静、止痒和抗炎抗感染的作用。但是以上药物均有副作用,长期使用会降低皮肤的抵抗能力,而中药治疗变应性接触性皮炎有着独特的优势,能通过多种途径,达到祛风利湿、清热润燥、抗过敏的功效,注重整体平衡,副作用小,刺激性较小,从而在根本上治愈变应性接触性皮炎。本文探讨的肤悦康熏洗液为中山市中医院制剂室配制,主要由苦参、芦荟、荆芥、地肤子等中药煎煮而成。本文初步探讨了肤悦康熏洗液对于变应性接触性皮炎的治疗效果,为肤悦康熏洗液的临床应用提供依据,现将研究的实验结果报告如下。2 实验材料2.1 试剂肤悦康熏洗剂(批号:20140924,由中山市中医院制剂室提供)醋酸泼尼松龙注射液(生产厂家:华中药业股份有限公司,生产批号:20140510)TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10、IL-18 、TXB2、PGE 2 ELISA 试剂盒(Cloud-Clone Corp.)2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitroehloro-benzol,DNCB)(厂家:上海远慕生物科技有限公司,实验时用丙酮配成 5%和 0.5%的 DNCB 丙酮溶液)丙酮和甲醛均为 AR 纯,蒸馏水由中山市中医院制剂室提供2.2 仪器Multiscan FC 型酶标仪(美国 Thermo)1Wellwash 洗板机(美国 Thermo)BX-50 型显微镜(日本 Olympus)T2000 型电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)MDF-382E(N)超低温冰箱(日本三洋)2.3 动物2.3.1 实验动物普通级豚鼠,白色短毛,4~5 周龄,250~300g,共 60 只,雌雄各半。由广东省实验动物中心提供,实验动物生产许可证:SCXK(粤)2013-0020。2.3.2 饲养环境均饲养于广东省中山市中医院中药药理实验室。环境温度 18~22℃,相对湿度 40~60%,通风良好、环境安静,室内保持明 10 小时、暗 14 小时。动物购进后观察 1 周,实验分组时,每组动物体重差异不超过平均体重的 20%。3 实验方法3.1 豚鼠变应性接触性皮炎模型的建立取豚鼠 60 只,参照文献 [1-2]受试豚鼠于实验前一天腹部剃毛,面积3cm×3cm,作为致敏区,实验当天以 5%DNCB 丙酮液 50uL 外涂剃毛区致敏,一天一次。2 周后,除正常组外其余豚鼠在背部脊柱两侧剃毛,按需要设 1 块3cm×3cm 并作好标记作为激发区,以 0.5%DNCB 丙酮液 100uL 涂满激发区激发,正常组涂以相同体积的丙酮 [3-4] ,每周 1 次,连续 3 次。记录激发后背部皮肤变化。最后一次激发后 48 小时内如有红斑、鳞屑、水肿、抓痕等则表示造模成功。3.2 实验分组及给药末次激发后 24 小时,将豚鼠分为①肤悦康洗剂高剂量组(2.4g 生药/ml);②肤悦康洗剂低剂量组(1.2g 生药/ml);③泼尼松龙注射液组(5ml:0.125g );
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